SHuffle T7 Express E. coli B Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞

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【常見問題】：貴司提供三款SHuffle T7化學(xué)感受態(tài)細胞，如何選擇呢？

菌株描述：

SHuffle T7 ExpressE. coliB菌株是一款基因工程改造的大腸桿菌B（E. coliB）菌株，是BL21源增強型菌株，特別設(shè)計以增強含多重二硫鍵蛋白在細胞質(zhì)內(nèi)的正確折疊，適合于T7啟動子驅(qū)動的蛋白表達。

該菌株染色體中整合一個拷貝的二硫鍵異構(gòu)酶基因—DsbC，促進錯誤氧化的蛋白轉(zhuǎn)化為正確形式。另外，細胞質(zhì)中的DsbC也是一個分子伴侶，能協(xié)助不含二硫鍵蛋白的正確折疊。該菌株缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，可減少對重組蛋白的降解。SHuffle T7 ExpressE. coliB菌株染色體中整合一個拷貝的T7 RNAP基因，可以表達噬菌體T7 TNA聚合酶，從而適用于T7啟動子誘導(dǎo)的蛋白表達。該菌株還能表達大腸桿菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達。SHuffle T7 ExpressE. coliB菌株具抵抗噬菌體T1（fhuA2）感染的特點，具鏈mei素和壯觀emi素抗性。

SHuffle T7 ExpressE. coliB菌株基因型：fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

產(chǎn)品描述

本品是SHuffle T7 ExpressE. coliB菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19載體檢測轉(zhuǎn)化效率>1×108cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品組分：

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1）   感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應(yīng)在-80℃保存（避免溫度波動），不可反復(fù)凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）   最好在冰上緩慢融化感受態(tài)細胞。不可在冰上放置時間過長，否則會降低轉(zhuǎn)化效率。

3）   進行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進行。

4）   轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

5）   為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

6）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用

7）   SHuffle T7 ExpressE. coliB菌株具鏈mei素、壯觀mei素抗性，不可用于具鏈mei素、壯觀mei素抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。

8）   為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時間、溫度、IPTG濃度（0.1~10mM）都需進行優(yōu)化。

9）   為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）   從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒，用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。

2）   42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3）   向每個離心管中加入700 μl無菌的LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復(fù)蘇。

4）   低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取50-100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應(yīng)抗生素的LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過夜培養(yǎng)。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

相關(guān)產(chǎn)品：

附表1 固體和液體LB培養(yǎng)基配方

附表2 固體和液體2-YT培養(yǎng)基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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