SHuffle T7 Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽

GT115化學感受態細胞；；DH10B；XL1-Blue；pCpG-free質粒；pCpG-mcs；pCpG-LacZ；

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【常見問題】：貴司提供三款SHuffle T7化學感受態細胞，如何選擇呢？

菌株描述

SHuffle T7菌株是一款基因工程改造的K12衍生菌株，特別設計改進含二硫鍵蛋白在細胞質內的表達，適合于T7啟動子驅動的蛋白表達。

該菌株染色體中整合一個拷貝的二硫鍵異構酶基因—DsbC，促進錯誤氧化的蛋白轉化為正確形式。另外，細胞質中的DsbC也是一個分子伴侶，能協助不含二硫鍵蛋白的正確折疊。SHuffle T7菌株染色體中整合一個拷貝的T7 RNAP基因，可以表達噬菌體T7 TNA聚合酶，從而適用于T7啟動子誘導的蛋白表達。LacIq基因的嚴格控制表達允許毒性基因得以克隆。SHuffle T7菌株具抵抗噬菌體T1（fhuA2）感染的特點，具鏈mei素和壯觀emi素抗性。

SHuffle T7菌株基因型：F′ lac, pro, lacIq / Δ(ara-leu)7697 araD139 fhuA2 lacZ::T7 gene1 Δ(phoA)PvuII phoR ahpC* galE (or U) galK λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB rpsL150(StrR) Δgor Δ(malF)3

產品描述

本品是大腸桿菌SHuffle T7菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19載體檢測轉化效率可達>1×108cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

產品包裝

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上融化感受態細胞。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

5） 產品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6） SHuffle T7菌株具鏈mei素、壯觀emi素抗性，不可用于具鏈mei素、壯觀mei素抗性質粒的轉化。

7） 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間、溫度、IPTG濃度（0.1~2mM）都需進行優化。

8） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的質粒，用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加入700 μl無菌的LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取50-100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過夜培養。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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