ATP-Red 1 (Live cell ATP probe)   活細胞ATP熒光探針

產品信息

產品描述

三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）主要在線粒體中產生，幾乎所有生物體都依賴ATP。ATP不僅是所有細胞過程的主要能源，而且還是調節細胞運動、神經傳遞和離子通道功能的信號分子。因此，生物學研究中對細胞內ATP水平變化的監測變得尤為重要。

ATP-Red 1（CAS NO：1847485-97-5）正是在這樣的背景下開發的一款優秀的多位點結合可切換的熒光探針，選擇性和快速檢測活細胞內的ATP水平[1]。活細胞成像顯示其主要定位在線粒體，表現出良好的生物兼容性和膜滲透性。不僅能觀察到由KCN和饑餓刺激引起的線粒體ATP降低，還能探測到凋亡早期發生的線粒體ATP增高，因此，是一款實用的工具以監測ATP相關的生理活動。

ATP-Red 1（CAS NO：1847485-97-5）的作用機制源其獨特的構象變化（見Fig 1）[1]。自然狀態下，ATP-Red 1以閉環和無熒光的形式存在，一旦遇到ATP，發生多位點反應（預測ATP分子上的氨基、磷酸基和核糖部分都有參與），使得探針內硼酸和核糖類似結構中的共價鍵斷裂，環打開。從閉環到開環的結構變化引起熒光的顯著增強。這一作用模式確保ATP-Red 1在與其他結構相近的核苷酸和胞內生物分子一起反應時，高選擇性結合ATP。ATP-Red 1對多種分析物無交叉反應，包括：Zn2+、Mg2+、Ca2+、Na2+、K+、GSH、HOCl、H2O2、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、果糖、核糖、山梨糖、蔗糖、木糖、肝素、AMP、ADP、CMP、CDP、CTP、UMP、UDP、UTP、GMP、GDP或GTP。

Fig 1.ATP-Red 1與ATP的反應流程圖

產品特性

1）CAS NO：1847485-97-5

2）分子式：C34H36BN3O4

3）分子量：561.48

4）純度：≥98%

5）外觀：固體

6）Ex/Em：510/590nm

7）溶解性：溶于DMSO（≥10mg/ml）

8）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：2-8℃避光干燥保存，長期不用可置于-20℃避光干燥保存，有效期至少一年。 

運輸：室溫運輸。

注意事項

1） 關于化合物溶解性：產品特性內的“≥"表明溶于標示濃度，但飽和溶解度未知。不同批次化合物的溶解度會有差異。

2） 為了讓化合物更好的溶解，可通過37℃加熱或（和）超聲波水浴中震動片刻來處理。若實驗所需濃度過大甚至達產品溶解極限，請添加助溶劑助溶或自行調整濃度。

3） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 儲存液的配制

1）于實驗前將產品從低溫取出，置于室溫平衡至少20min；低速離心將所有的固體都沉淀至管底。

2）于超凈臺內開蓋，直接往瓶內加入適量高質量無水的DMSO，使其充分溶解配制成10mM或其他濃度的儲存液。比如：1mgATP-Red 1（Mw：561.48），加入178.1μl DMSO，充分溶解，混勻后即得到10mM的儲存液。根據單次用量分裝，≤-20℃避光干燥凍存，避免反復凍融。一般情況下，-20℃避光保存，一個月穩定；-80℃避光保存，六個月穩定。

2. 工作液的配制

于正式實驗前，用適宜的生理緩沖液（比如：HHBS、HBSS）或無血清培養基稀釋儲存液到所需的工作濃度，比如：5-10µM。工作液現配現用！

3.   染色步驟

以下步驟僅做參考，用戶可根據自身情況做調整。

1）細胞鋪板：在合適的培養皿或培養板中接種細胞（比如：96孔板、玻底培養皿）；對于96孔板，接種密度一般在1~2 ×105個細胞/孔。

2）在適宜的培養條件下培養細胞到適宜的密度。

3）吸走培養基，用預熱的PBS或無血清培養基清洗一次。

4）加入適量新鮮配制的ATP-Red 1染色工作液，原則上能完quan覆蓋細胞即可。

5）37℃避光孵育15~30min。需根據細胞類型優化孵育時間。

6）用PBS或無血清培養基清洗一次以去除多余染料。

7）用熒光顯微鏡或安裝有適合濾片的流式細胞儀（Ex/Em~510/590nm）來進行數據分析。

應用示例（來自文獻）

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。