SYTOX Blue Nucleic Acid Stain (5 mM in DMSO)

藍(lán)色熒光核酸染料

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

SYTOX Blue核酸染料（SYTOX Blue Nucleic Acid Stain），是一種高親和力的核酸染料，輕易滲透進(jìn)入受損的細(xì)胞質(zhì)膜，但不能穿透活細(xì)胞膜。探針只需簡單孵育，使用汞弧燈（Mercury arc lamp）的436nm光譜線進(jìn)行激發(fā)，死細(xì)胞的核酸則呈明亮的藍(lán)色熒光。結(jié)合以上特征，以及熒光增強(qiáng)＞500倍（與核酸結(jié)合）的優(yōu)點(diǎn)，使其成為一種簡單且定量的一步法死細(xì)胞指示劑，當(dāng)用熒光顯微鏡、熒光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)板和流式細(xì)胞儀（安裝有弧燈）檢測。SYTOX Blue這一死細(xì)胞核酸染料可與具對(duì)比顏色（比如：綠色、紅色、深紅色熒光）的表面標(biāo)記聯(lián)合使用，用于多指標(biāo)分析。

本品以DMSO儲(chǔ)存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進(jìn)行簡單孵育即可。適用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、細(xì)菌和酵母菌。

產(chǎn)品特性

1） 同義名：SYTOXBlue dye；SYTOXBlue死細(xì)胞染料；SYTOXBlue細(xì)胞核染料；

2） 外觀：黃色溶液

3） 熒光特征：Abs/Em=444/480nm（與DNA結(jié)合）（圖1），需注意細(xì)菌或真核細(xì)胞中SYTOXBlue的光譜特征可能發(fā)生變化。

4）滲透性：不能進(jìn)入活細(xì)胞

保存與運(yùn)輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，亦可置于-80℃避光干燥保存，至少1年有效。

運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

文獻(xiàn)來源1）Truernit, E., Haseloff, J. A simple way to identify non-viable cells within living plant tissue using confocal microscopy. Plant Methods 4, 15 (2008)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簻y試長時(shí)期孵育后，SYTOX染料（包括：SYTOX Blue）是否仍特異性檢測無活力細(xì)胞。

染色對(duì)象：擬南芥根部    染色劑量：SYTOX Blue（250nM）

Fig 1. Specificity of SYTOX dyes after longer staining times.Shown are roots stained for 20 min with SYTOX green (A), blue (B), or orange (C). All dyes stain most brightly the non-viable cells at the end of the lateral root cap. SYTOX green and SYTOX blue show slight background staining in the rest of the root. All images are overlay projections of CLSM images. Scalebars: 100 μm.文獻(xiàn)來源2）Shi T, van Soest DMK, Polderman PE, Burgering BMT, Dansen TB. DNA damage and oxidant stress activate p53 through differential upstream signaling pathways. Free Radic Biol Med. 2021 Aug 20;172:298-311. doi: 10.1016/j.freeradbiomed.2021.06.013. Epub 2021 Jun 16. PMID: 34144191.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模菏褂肅alcein AM/SYTOXblue的組合來檢測細(xì)胞活力。Calcein AM染活細(xì)胞，SYTOX Blue染死細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)方法：1×104RPETert and RPETert p53 KO cells接種在96孔板，第二天細(xì)胞用二酰胺（diamide）、H2O2 或NCS處理72h，之后加入Calcein AM/SYTOXblue混合染料（濃度分別是1 μM），37℃避光孵育30min，用Spectra Max Fluorometer測定熒光值（Calcein AM：Ex/Em=485/535nm；SYTOXblue：Ex/Em=444/460nm；）

Fig 2. Single-molecule rolling-circle replication assays. (B) Kymograph of an individual DNA molecule undergoing leading- and lagging-strand replication. The gray indicates the fluorescence intensity of dsDNA stained by SYTOX orange.

染色流程（更多內(nèi)容見說明書）

以下步驟適用于任何細(xì)胞類型，需注意不同細(xì)胞類型所需的探針工作濃度范圍有差異（見表2）。生長培養(yǎng)基、細(xì)胞密度、是否存在其它細(xì)胞、和其它因素都可能影響染色。總的來說，不在磷酸鹽的緩沖液中能得到zuihao的結(jié)果。玻璃器皿上殘留的去污劑也有可能影響許多有機(jī)體的真實(shí)染色，導(dǎo)致含或不含細(xì)胞的溶液中都能發(fā)現(xiàn)明亮熒光的材料。確保用溫和去污劑來清洗玻璃器皿，用熱自來水完quan沖洗干凈，最后用去離子水清洗數(shù)次。

注意事項(xiàng)

1） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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