SHuffle T7 Express lysY Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

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【常見問題】：貴司提供三款SHuffle T7化學感受態細胞，如何選擇呢？

基于兩種不同的大腸桿菌菌株，有兩個版本的SHuffle T7菌株。SHuffle T7（貨號：MF2291）是基于大腸桿菌K12改造，而SHuffle T7 Express lysY（貨號：MF2289）和SHuffle T7 Express E. coli B（貨號：MF2290）是基于大腸桿菌B菌株改造。我們發現，相同蛋白在不同菌株中的折疊和表達水平都有差異，目前來說，無法直接預測哪款菌株能更成功的折疊某一款既定的含二硫鍵蛋白。因此，我們建議客戶在初次實驗中，可自行比較目的蛋白在不同菌株中的表達，從而選擇更適合的菌株。一旦確定好菌株后，再進行表達條件的優化（比如：溫度、誘導強度和時間等）。。

所有的Shuffle菌株都能用于非T7啟動子（比如：lac和ara啟動子表達載體）。對于T7啟動子表達載體，建議要么選擇SHuffle T7（貨號：MF2291）或SHuffle T7 Express E. coli B（貨號：MF2290）。對于毒性T7啟動子表達，建議選擇SHuffle T7 Express lysY（貨號：MF2289）。

菌株描述：

SHuffle T7 Express lysY菌株是SHuffle T7 ExpressE. coliB的衍生菌株，特別設計以增強含多個二硫鍵蛋白在細胞質內的正確折疊，并且降低本底表達，適合于T7啟動子驅動的蛋白表達。

SHuffle T7 Express lysY菌株含lysY質粒（氯mei素抗性），這個質粒含表達T7溶菌mei的基因，能夠降低目的基因的背景表達水平，同時不干擾IPTG的誘導表達，適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。SHuffle T7 Express lysY菌株的染色體中整合一個拷貝的二硫鍵異構酶基因—DsbC，促進錯誤氧化的蛋白轉化為正確形式。另外，細胞質中的DsbC也是一個分子伴侶，能協助不含二硫鍵蛋白的正確折疊。該菌株缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，可減少對重組蛋白的降解。

SHuffle T7 Express lysY菌株染色體中整合一個拷貝的T7 RNAP基因，可以表達噬菌體T7 TNA聚合酶，從而適用于T7啟動子誘導的蛋白表達。該菌株還能表達大腸桿菌RNA聚合酶，所以可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達。SHuffle T7 Express lysY菌株具抵抗噬菌體T1（fhuA2）感染的特點，具鏈mei素、壯觀emi素和氯emi素抗性。

SHuffle T7 Express lysY菌株基因型：MiniF lysY (CamR) /fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT ahpC gal λatt::pNEB3-r1-cDsbC (SpecR, lacIq) ΔtrxB sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10 --TetS) endA1 Δgor Δ(mcrC-mrr)114::IS10

產品描述

本品是SHuffle T7 Express lysY菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19載體檢測轉化效率>1×108cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

產品組分：

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存（避免溫度波動），不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上緩慢融化感受態細胞。不可在冰上放置時間過長，否則會降低轉化效率。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 轉化高濃度的質?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

5） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

6） 產品包裝內含載體pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用

7） SHuffle T7 Express lysY菌株具鏈mei素、壯觀emi素、氯emi素抗性，不可用于具鏈emi素、壯觀emi素和氯emi素抗性質粒的轉化。

8） 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間、溫度、IPTG濃度（0.1~10mM）都需進行優化。

9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的質粒，用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吹打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加入700 μl無菌的LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取50-100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含相應抗生素的LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，之后倒置放于37℃過夜培養。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（5,000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

相關產品：

附表1固體和液體LB培養基配方

附表2 固體和液體2-YT培養基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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