SM10 λpir Chemically Competent Cell

大腸桿菌化學感受態細胞

產品訂購：更大包裝或產品技術問題

菌株描述

SM10 λpir是從SM10菌株改造而來，SM10是S17-1菌株的衍生菌，后者是構建用于高效接合轉移的經典菌株。SM10 λpir菌株適用于作為攜帶R6K復制起始位點（ori）的穿梭質粒或自sa性質粒的接合轉移供體菌株（donor strain），常用于基因敲除、細菌遺傳學操作和轉座子誘變。

SM10 λpir菌株的主要特征：

j 接合轉移功能：含整合在染色體上的RP4接合轉移系統基因（RP4-2-Tc::Mu），使其能高效的將攜帶oriT（轉移起始位點）的質粒通過接合作用轉移到受體菌（recipient strain），比如：沙門氏菌、志賀氏菌、假單胞菌、耶爾森菌、霍亂弧菌等其他革蘭氏陰性菌。

k λpir溶原菌：表達pir蛋白（pir基因產物），pir蛋白是R6K質粒復制起始位點 (oriR6或oriV)的特異性復制起始蛋白，只有表達pir蛋白的宿主細胞才能復制帶oriR6K復制起點的質粒。

l recA1：缺失同源重組能力，維持質粒在供體菌中的穩定性。

m 鏈mei素敏感:便于接合后利用鏈mei素進行受體菌的反向篩選（SM10本身對鏈mei素敏感，然而許多受體菌具鏈mei素抗性）。

n 選擇性標記（抗性標記）: 染色體上含卡那mei素抗性基因（Km?）

SM10 λpir菌株基因型：thi thr leu tonA lacY supE recA::RP4-2-Tc::Mu (Km?) λpir

產品描述

本品是大腸桿菌SM10 λpir菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達1×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

產品包裝

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存。

2） 最好在冰上融化感受態細胞，不可在冰上放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到最di。

5） 產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實驗用。

6） SM10 λpir菌株具卡那抗性，不能用于攜帶卡那抗性質粒的轉化。

7） 后續進行陽性菌落的擴繁和高純質粒的獲取，推薦選用TB培養基（Terrific Broth），優于LB或SOC。

8） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

3） 向每個離心管中加700 μl無菌的LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質粒篩選抗生素的LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養過夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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附錄S17-1 λpir(pSC189) and SM10 λpir(pSC189)供體菌的構建

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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