Frozen-EZ酵母轉化試劑盒Ⅱ

產品亮點
快速：可以在不到10分鐘的時間內制備具有高轉化效率的酵母細胞。
簡單：用載體DNA在不到1小時的時間內用單個或多個質粒轉化的簡便方法。
用途廣泛：可與釀酒酵母以及其他真菌（包括白色念珠菌，粟酒裂殖酵母和巴斯德畢赤酵母）一起使用。與環狀和線性DNA兼容。
  
產品描述

與現有方法相比，Frozen-EZ酵母轉化II試劑盒旨在使酵母轉化和文庫篩選更加容易和高效。用Frozen-EZ Yeast Transformation II試劑盒制備的酵母細胞可立即用于轉化，或可儲存（即≤-70°C）以備后用。用該試劑盒制備的酵母可以用環狀和線性DNA轉化。另外，Frozen-EZ酵母轉化II試劑盒可與其他真菌一起使用，包括白色念珠菌，粟酒裂殖酵母和牧羊犬。
 
 技術指標

感受態細胞穩定性    -70°C≥1年
處理時間      ≤15分鐘
產品儲存      0-4°C
轉化DNA輸入        0.2-1.0微克
轉型效率               10 5 – 10 6 CFU /微克質粒DNA。

常見問題

Q1：該套件中有什么？它如何工作？

該套件中使用的程序在某種程度上類似于基于鋰陽離子的方法進行設計。不涉及原生質球步驟。該機制可能涉及一些我們尚不完quan了解的代謝途徑。

問題2：此套件可用于白色念珠菌，粟酒裂殖酵母或巴斯德畢赤酵母嗎？

是。根據其他實驗室和我們實驗室的數據，該試劑盒在白色念珠菌，粟酒裂殖酵母或畢赤酵母以及啤酒酵母中也能正常工作。

問題3：我的感受態酵母細胞在-70°C以下可以保存多長時間？

在-70°C以下儲存半年后，轉換效率不會降低。6個月后，轉換效率逐漸開始下降。

Q4：我應該如何解凍儲存的冷凍感受態細胞？

在室溫下解凍。

問題5：凍結和解凍的頻率會影響轉化效率嗎？

在冷凍的第一個周期后，我們通常會看到轉化子增加10-30％。您可以重新冷凍和融化感受態酵母細胞3-4次，而對轉化效率沒有明顯影響。進一步的凍融循環不利地影響轉化效率。

問題6：在轉化的第2步中，我是否需要嚴格在30°C下孵育？

不能。溫度在30°C至37°C之間處于溫度范圍。低于或高于此范圍的溫育會大大降低轉化效率。

Q7：是否可以不經純化直接使用限制性酶消化的DNA？

是。不同的消化緩沖液對轉化效率的影響很小。您應該通過提高消化反應中DNA的濃度，嘗試將每個轉化實驗的DNA體積保持在5 µl。

Q8：我應該在選擇性板上撒多少轉化混合物？

對于大多數環形質粒轉化，50 µl就足夠了。但是，如果您使用線性化DNA或使用多個選擇標記，則可以在每塊板上上樣多達200 µl的轉化混合物，以增加轉化體的數量。轉化子的數量隨著施加到每個板上的轉化混合物的數量線性增加。

Q9：我需要使用帶有山梨糖醇的平板嗎？

否。請使用適合您實驗的任何平板。

Q10：我需要添加載體DNA嗎？

不需要。不需要載體DNA。

引文

Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species.

Curran KA, et. al. (2014) Design of synthetic yeast promoters via tuning of nucleosome architecture. Nat Commun. 5:4002.

The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength.

Nevoigt, E., et al. (2006) Engineering of promoter replacement cassettes for fine-tuning of gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Appl Environ Microb, 72(8): 5266-5273.